在细胞体外培养中，污染就像一个潜伏的“隐形杀手”，始终威胁着实验的准确性与稳定性。在被研究者广泛关注的污染源中，支原体、细菌和真菌是最常见的三大类，而支原体污染以超高的30%-60%发生率，成为科研工作者最为棘手的难题之一。本期我们将深入探讨支原体污染的防治要点，助你高效应对这一实验室“顽疾”，为细胞培养实验保驾护航。

什么是支原体？

支原体（Mycoplasma），也称为霉形体，属于柔膜体纲（Mollicutes），目前已知的原核生物中体积最小。它的结构由脂蛋白膜、核糖体和圆形双链DNA组成，基因组大小介于580-2,200kb之间。尽管支原体能在无生命培养基上生长，但它的生物合成能力有限，依赖外源营养成分。细胞培养体系为支原体提供了适宜的生长条件，成为其繁殖的理想环境。此外，支原体能够附着在宿主细胞的表面进行长期繁殖存活，其对常见抗生素的耐药性为细胞培养带来更大的污染隐患。

支原体污染的表现

自然界中支原体种类超过120种，但在细胞培养中，常见的污染菌株包括牛精氨酸支原体、发酵支原体等。这些菌株的污染会导致细胞出现一系列特征性变化，如细胞生长速率异常、形态改变、染色体结构不稳定等。这些变化虽然缺乏特异性，但会干扰细胞正常生理状态，造成实验结果的失真。特别是支原体的直径仅为0.1-0.3μm，远低于常规细胞，且因无细胞壁而折光性极低，使其难以通过普通光学显微镜识别。因此，一旦细胞出现不明原因的生长或形态异常，就需优先考虑支原体污染的可能性。

支原体污染检测

准确检测是防治支原体污染的关键。目前常用的检测方法包括观察法、培养法、免疫法、DNA荧光染色法、分子法和发光法。其中，培养法和DNA荧光染色法是《中国药典》推荐的方法。培养法是检测支原体的“金标准”，但操作周期较长，而qPCR则是敏感度最高的快速检测方法。

支原体清除方法

发现支原体污染后，及时且有效的清除措施至关重要。清除支原体的核心在于破坏其脂蛋白膜结构及抑制关键代谢途径。由于支原体与细胞培养特性相似，如何在清除支原体的同时保持细胞活性是一项巨大挑战。

01 热处理法：支原体的耐受温度范围在35-37℃，将污染细胞置于41℃处理5-10小时（最长不超过18小时），可以杀灭支原体。然而，不同细胞对高温的耐受程度不同，需谨慎使用。

02 抗生素法：支原体对某些抗生素（如卡那霉素、庆大霉素等）敏感，在含抗生素的培养基中进行多次传代培养，检测为阴性即视为清除成功。但需注意，过度使用抗生素可能引发耐药或毒性反应。

03 复合型支原体清除试剂：推荐使用含有抗生素和脂蛋白膜穿透剂的复合型清除试剂，如尊龙凯时推出的Anti-Myc支原体清除试剂，能够有效破坏支原体的脂蛋白膜，干扰其代谢途径，抑制DNA复制，从而达到清除目的。该方法操作简便，对细胞的毒性较小，有助于维持细胞活性。

在清除支原体之后，需通过qPCR、DNA荧光染色等方法进行检测，以确认支原体是否已被完全清除，避免因试剂残留或支原体复苏造成假阴性结果。

尽管支原体体积极小，但却是细胞培养中破坏性极大的污染源。唯有深入了解其特性、及时发现污染信号，并掌握合适的检测与清除手段，才能真正保障细胞实验的可靠性与稳定性。通过尊龙凯时的优质产品和服务，让我们携手共建更安全的细胞培养环境。